Реакция прямой гемолитической агглютинации (РПГА)

Что такое РПГА и какие имеет особенности

Реакция пассивной гемагглютинации, используется для расшифровки аббревиатуры РПГА, так и РНГА. Это диагностический тест, применяется для обнаружения растворенного количества антител в образце сыворотки пациента против возбудителей сифилиса. Чтобы быть точным, РПГА помогает в обнаружении антител к аллергену k48 с помощью метода непрямой гемагглютинации.

Процесс включает чувствительность эритроцитов фрагментами Т. палладия. При воздействии на образец сыворотки крови, клетки собираются на поверхности чашки для анализа. Реакция пассивной гемагглютинации относится к специфическим или трепонемным тестам, поскольку в нем используются настоящие, сифилитические антигены.

Тесты очень чувствительны, но, поскольку они неспецифичны, ложноположительные результаты случаются. Это бывает при внутривенном употреблении наркотиков, беременности, болезни Лайма, некоторых типах пневмонии, малярии, туберкулезе и некоторых аутоиммунных заболеваниях, включая волчанку. Изучение особенностей иммунного ответа у больных сифилисом требует детального исследования антигенной структуры возбудителя и его влияния на систему органов хозяина.

Виды анализов крови на сифилис

Для диагностики сифилиса разработан целый ряд методов, но ни один из них не дает 100% точного результата. Материалом для исследования чаще всего служит плазма крови, также используется отделяемое из кожных высыпаний, в некоторых случаях проводится пункция лимфоузлов. К основным видам исследования относят серологические анализы, которые используют для первоначальной диагностики и для контроля результатов терапии.

Серологические анализы на сифилис основаны на механизме образования в организме, при попадании в него возбудителя заболевания, антител, которые взаимодействуют со специальными антигенами. Основные серологические анализы крови на сифилис следующие:

• Реакция Вассермана – в ходе этого анализа к сыворотке крови пациента добавляют сифилитические антигены для определения антилипидных антител (реагинов). Антигены образуют с реагинами иммунный комплекс, который адсорбирует и связывает комплемент. При образовании такого комплекса эритроциты не разрушаются, а выпадают в осадок, что указывает на положительную реакцию. Если в сыворотке крови реагины отсутствуют, происходит гемолиз (разрушение эритроцитов), в этом случае реакция отрицательная.
• Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном (RPR или РМП) — скрининговый метод диагностики сифилиса, который можно рассматривать как более современную модификацию реакции Вассермана. Основными показаниями к тому, чтобы сдать анализ крови на сифилис этим методом являются первичное обследование, медицинские осмотры, контроль эффективности терапии. Если при расшифровке анализа крови на сифилис этим методом получен положительный результат, для его подтверждения назначают другие более точные тесты.
• Анализ крови на сифилис ИФА (иммуноферментный анализ крови) — относится к передовым и перспективным методам лабораторной диагностики этого заболевания. Принцип исследования заключается в выявлении специфического комплекса антиген-антитело, который образуется при соединении сифилитических антигенов, абсорбированных на твердом носителе, с антителами сыворотки крови пациента. В современной медицинской практике распространен непрямой вариант анализа крови на сифилис ИФА, при котором используются антитела к иммуноглобулинам человека, соединенные с ферментными маркерами. В зависимости от количества связанных антител происходит окрашивание конечных продуктов этой реакции, по степени которого и оценивают результаты анализа.
• Анализ на реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) – в ходе этого исследования изучают соединение возбудителей сифилиса в сыворотке крови с обработанными специальными методами бараньими эритроцитами. Если в сыворотке крови присутствуют бледные трепонемы, происходит агглютинация эритроцитов, то есть склеивание с последующим осаждением. Для расшифровки анализа крови на сифилис методом РПГА оценивают окрашивание пробы, так как агглютинат эритроцитов имеет темно-красный цвет.
• Исследование реакции иммунофлюоресценции (РИФ) – в ходе этого анализа определяется интенсивность свечения бледных трепонем в препарате, которая возникает, только если в сыворотке крови присутствуют антитрепонемные антитела.
• Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) – самый специфичный диагностический тест на сифилис, при этом в сыворотке крови определяют наличие видеоспецифичных антител (иммобилизинов), которые обездвиживают бледные трепонемы в присутствии комплемента. Под микроскопом проводят подсчет доли утративших подвижность (иммобилизованных) бледных трепонем. Данный анализ крови на сифилис проводят не ранее чем через 2 недели после окончания приема антибиотиков и других лекарственных средств.

Анализ RPR может дать ложноположительную реакцию, так как антитела к нему могут выделяться не только при сифилисе, но и в результате некоторых других заболеваний. По статистике анализ на реакцию Вассермана дает один ложноположительный результат на 10 000 исследований. Чтобы исключить ошибочную диагностику сифилиса, результат дополнительно уточняют с помощью других исследований. Наиболее точными методами считаются РИФ, РИБТ и ИФА, которые позволяют выявить сифилис уже в инкубационном периоде и на всех последующих стадиях.

Показания к проведению

Лечащий врач, назначает РПГА, если есть вероятность инфекционного венерического заболевания. В других случаях врач может обследовать на обнаружение антител к трепонема паллидум, даже если нет симптомов или причин полагать, что есть заболевание. Например, анализ на наличие сдается в качестве обычной части обследования, в случае беременности. Это стандартная процедура, и это не значит, что врач считает, что есть сифилис.
Ранние признаки, которые могут быть при этом состоянии, включают:

• одна маленькая безболезненная рана;
• припухлость в лимфатических узлах возле поражения;
• не зудящая, кожная сыпь.

Исследование назначается, когда проводится лечение от другой ИППП, такой, как гонорея, если инфицированы ВИЧ, или был половой акт с высоким риском инфицирования. Когда проводилось лечение от сифилиса, рекомендуется провести повторное тестирование, чтобы убедиться, что терапия сработала и инфекция вылечена.

Как подготовиться к сдаче

Анализ не требует особой подготовки, все правила соответствуют обычной сдаче венозной крови.
От пациента требуется строго соблюдать ряд простых правил:

• за 72 часа до манипуляции следует соблюдать диету: нельзя употреблять в пищу жирное, жареное, соленое и острое, алкогольные напитки также запрещены;
• рекомендуется поддерживать оптимальный водный баланс в организме, а для этого необходимо пить не менее двух литров чистой питьевой воды;
• анализ венозной крови проводится на голодный желудок, поэтому минимум за 10 часов до манипуляции нельзя есть, пить чай, кофе и другие напитки;
• за 4 часа до процедуры запрещается курить.

Если по состоянию здоровья пациент обязан пить какие-либо таблетки, необходимо заранее предупредить об этом лечащего врача. За час до сдачи материала рекомендуется избегать физических нагрузок, а перед тем, как зайти в процедурный кабинет, следует присесть и отдохнуть 10-15 минут.

Какие заболевания можно выявить в ходе диагностики

Анализ гемагглютинации Treponema pallidum (РПГА) – это трепонемный тест для серологического диагноза сифилиса, инфекции, передаваемой половым путем, вызванной спирохетой и бледной трепонемой. Основываясь на принципе пассивной гемагглютинации, анализ выявляет антитрепонемные антитела (IgG и IgM) в сыворотке.

Этот важный диагностический тест, используется для обнаружения сифилиса. Это заболевание, передающееся половым путем. Болезнь характеризуется четырьмя стадиями, а именно первичной, вторичной, латентной и третичной. Лечение зависит от стадии инфекции. Очень важно диагностировать инфекцию как можно раньше. Это помогает в предотвращении повреждения основных органов тела. Диагностировать его начальные симптомы всегда сложно, так как он проявляется только в форме небольшой безболезненной раны, называемой шанкром.

Лабораторная диагностика сифилиса

Серологические исследования базируются на иммунных связях, которые наблюдаются в сыворотке крови.

Белковые соединения сливаются с антигенами, в результате этого взаимодействия антигены микробов купируются.

После внедрения возбудителя (Treponema pallidum) в организме начинают вырабатываться защитные антитела.

Они атакуют микробы и предотвращают распространение болезни.

Для анализа берется кровь, добавляется в нее суспензия микробов.

Если реакция не произошла — человек здоров, произошла — болен.

Иммуноглобулины при сифилисе (иммуноглобулины к бледной трепонеме) — белки-защитники, продуцируемые для его нейтрализации.

Они выявляют инфекцию в крови, ее остатки после проведенной терапии.

Каждый из антител к Treponema pallidum имеет конкретный информативный статус, назначение и конфигурацию.

Иммуноглобулины А при сифилисе

Осуществляют контроль за местным иммунным ответом — ранней защитой, реагирующей на попадание инфекционного агента в определенный сегмент организма.

Производятся в значительной концентрации на слизистых кишечника, легких, полости рта, в незначительной — в крови.

Являются маркером активной инфекции, считаются неспецифическими, поскольку дают ответ и на другие бактерии.

Иммуноглобулины М при сифилисе

Курируют общий иммунитет.

Отличаются слабой специфичностью.

Способствуют эвакуации антигенов, предупреждают их фиксацию в тканях и запуск патологических процессов.

Их наличие указывает на активную стадию заболевания, после лечения эти белки пропадают.

Иммуноглобулины G при сифилисе

Основные иммуноглобулины вторичного иммунитета.

Обеспечивают высокую напряженность иммунного ответа в течение длительного срока.

Клетки памяти этих белков организм способен продуцировать несколько лет после приема профильных лекарственных препаратов.

Кто в зоне риска

Любой человек с признаками или симптомами заболевания, должен быть проверен на сифилис. Некоторым пациентам следует пройти скрининг, даже если у них нет симптомов или они знают о сексуальном партнере, который инфицирован. Сексуально активные люди, могут обсудить свои факторы риска с врачом и спросить, какие необходимо сдать анализы на сифилис или другие ЗППП.

К числу наиболее подверженных риску относятся:

• те, кто занимается незащищенным сексом;
• пациенты с ВИЧ;
• люди с многочисленными сексуальными партнерами.

На заметку! Когда у беременной женщины диагностирован сифилис, инфекция может быть передана ее будущему ребенку. Все беременные женщины должны быть проверены при первом дородовом посещении.

РПГА при сифилисе является методом первичной неспецифической лабораторной диагностики. Это самый часто используемый анализ во всем мире для скрининга. Исследование применяется из-за его простоты, чувствительности и доступности. РПГА имеет количественные данные о титре антител. Эта оценка обладает необходимым значением в будущем лечении.

Лица с положительным нетрепонемным тестом, к ним относится RW или всем известная реакция Вассермана, всегда должны проходить трепонемный анализ для подтверждения диагноза сифилиса. Эта цепочка процедур считается классическим алгоритмом тестирования.

Исследование РПГА для диагностики других инфекций и патологий

Исследование РПГА может проводиться не только для выявления в организме возбудителя сифилиса. Чтобы диагностировать инфекцию сальмонеллы, врачи назначают Анализ с сальмонеллезным диагностикумом. Образец отправляется в лабораторию, где бактерии, если они присутствуют, могут быть выращены. Выявление бактерий в образце подтверждает диагноз. Отрицательный результат говорит об отсутствии инфекции. Количественное значение титра от 1:200 до 1:800 говорит об острой фазе инфекции.

Измерение сывороточных антител пациента к дифтерийному токсину перед введением антитоксина поможет оценить вероятность диагноза дифтерии. Метод проведения РПГА с дифтерийным маркером позволяет диагностировать заболевание. Титр 1:80 подтверждает наличие дифтерии в организме.

Предостережение! Явление прозоны и биологическая ложно-положительная реакция являются двумя недостатками этого теста.

Врач может назначит анализу РПГА на наличие вируса кори. Проведение исследование с коревым маркером показывает, есть ли в организме антитела для борьбы с вирусом. Если присутствует достаточное количество антител к кори, то говорят, что у человека есть признаки иммунитета к кори.

Положительный

Если результат анализа РПГА оказался положительным, то это еще не повод для паники. Для постановки точного диагноза необходимо осуществить повторное исследование и исключить факторы, которые могли дать ложноположительный результат.

Если диагноз подтверждается, то больному назначается комплексное лечение. Чаще всего пациента помещают в кожно-венерологический диспансер, где терапия совмещается с контролем над состоянием больного. Заболевание является достаточно серьезным, поэтому курс лечения может превышать по своей продолжительности срок в два года.

Особенности проведения

Перед выполнением процедуры испытания, необходимо подержать образец, разбавитель, контрольные и испытательные ячейки при комнатной температуре (25-30 ° C). Для каждого качественного теста требуется тестовая карта с тремя лунками. Положительный и отрицательный контроль следует проводить вместе с тестируемой сывороткой. При РПГА эритроциты, поверхность которых адсорбировала антигены бледной трепонемы, склеиваются друг с другом, то есть происходит их агглютинация.

A: Разведение образца сыворотки:

1. Добавляется 10 мкл сыворотки пациента в первую лунку А.
2. Затем присоединяется 190 мкл разбавителя.
3. Содержимое перемешивается с помощью микропипетки (разведенная сыворотка используется позже).

B: Тестирование образца сыворотки на наличие специфических антител:

1. Добавляется 75 мкл контрольных клеток в лунку B и 75 мкл тестовых клеток в лунку C.
2. Прибавляется 25 мкл разведенной сыворотки в каждую лунку B и C.
3. Аккуратно встряхивается пластина, чтобы тщательно перемешать содержимое.
4. Ячейки накрываются для защиты от прямых солнечных лучей, тепла и любых источников вибрации.
5. Инкубируются 45-60 минут при комнатной температуре.
6. Затем происходит интерпретация результатов.

Подготовка и показания к РПГА

Анализ крови на РПГА – это простое исследование, образец биоматериала берется путем введения иглы в вену на руке. Позже он отправляется в лабораторию для дальнейшего анализа. Чтобы результаты скрининга были достоверными, следует придерживаться необходимых рекомендаций. Чаще всего результаты анализа доступны в течение суток, иногда может потребоваться от 2 до 4 дней.

Подготовка к исследованию:

1. Анализ необходимо сдавать натощак (6-8 часов голода).
2. За 30 минут до проведения теста лучше воздержаться от курения;
3. За 24 часа до тестирования запрещается употреблять алкоголь.

Любой, кто обеспокоен тем, что может быть инфицирован или есть другая ИППП, должен поговорить с врачом и пройти исследование. Раннее лечение может вылечить заболевание. Многие люди могут не знать, что они инфицированы. Исследование крови это хорошая идея, чтобы обнаружить заболевание.

Показания к РПГА:

• после незащищенного секса;
• когда имеется несколько половых партнеров;
• если у сексуального партнера диагностировано заболевание;
• при имеющихся симптомах сифилиса.

Примечание! Когда доктор подозревает, что сифилисная инфекция перешла на мозг, доктор может решить дополнительно проверить спинномозговую жидкость в дополнение к крови.

Что может повлиять на результат

Результаты теста могут быть ложно-положительными по многим причинам. На результат анализа, влияют некоторые заболевания. К ним относятся риккетсиозные инфекции, такие как сыпной тиф или пятнистая лихорадка Скалистых гор. Результаты могут быть неточными, если скрининг проводится слишком рано после заражения инфекцией. Через 14–21 день после заражения иммунный ответ организма обнаруживается с помощью теста. Употребление алкоголя в течение 24 часов до теста также может дать ложно-отрицательный результат.

Факторы влияющие на результат анализа:

• беременность;
• внутривенное употребление наркотиков;
• туберкулез;
• хронические заболевания печени;
• недавние прививки или воспаление слизистой оболочки сердца или клапанов.

Рекомендация! При расшифровке крови на РПГА, убедитесь, что врач знает обо всех лекарствах, травах, витаминах и добавках, которые принимаете. Это включает препараты, не нуждающиеся в рецепте, и любые запрещенные наркотики.

Расшифровка результатов

Значение теста может быть расшифровано интенсивностью склеивания, которая может быть от – до 4+. Понимание этих случаев дает четкое представление о наличии антител к инфекции.

Лабораторный скрининг можно объяснить следующим образом:

1. 4+, если есть равномерный мат из клеток, охватывающих всю лунку.
2. 3+, если большая часть лунки покрыта однородным матом клеток.
3. Мат с меньшей плотностью, окруженный небольшим кольцом (+2), является еще одним сценарием положительного анализа.
4. Интенсивность мата уменьшается и окружена более плотным кольцом с отчетливо открытым центром.

Если имеется небольшой четкий центр и клетки располагаются на дне, результат можно считать как отрицательный РПГА. Показатели соответствующие нормальному диапазону, дальнейшее исследования не требуют. Но в случае промежуточного положительного теста назначаются исследование MHA-TP и FTA-ABS.

Примечание! Нормальные диапазоны значений могут незначительно отличаться в разных лабораториях. Некоторые лаборатории используют разные измерения или тестируют разные образцы. Поговорите со своим лечащим врачом о значении результатов исследования.

Положительный результат

Если результат РПГА окажется положительным, вероятно, но не обязательно, есть заболевание. В этом случае, врач назначит более специфическое исследование для подтверждения результатов. Трепонемический тест часто используется для подтверждения положительного анализа. Он проверяет, вырабатывала ли иммунная система антитела в ответ на вызывающую сифилис бледную трепонему.

После постановки окончательного диагноза, обязательно пройти полное лечение. Необходимо пройти полный курс лечения антибиотиками, даже если симптомы проходят. Несоблюдение этого требования может вызвать рецидив.

Отрицательный результат

Отрицательный тест – это нормально. Это означает, что в образце крови не было обнаружено антител к сифилису. Нормальные диапазоны значений могут незначительно отличаться в разных лабораториях. Некоторые медицинские центры используют разные измерения или тестируют разные образцы. Поговорите с лечащим врачом о значении результатов.

Этот тест может дать ложно-отрицательный результат при ранней и поздней стадии болезни. Анализ должен быть подтвержден другими скринингами, чтобы поставить окончательный диагноз.

О ложноположительных значениях

Антитела, вырабатываемые в результате инфекции, могут оставаться в организме даже после того, как вирус был вылечен. В некоторых случаях организм может не продуцировать антитела, даже если человек заражен сифилисом. Это означает, что анализ будет неточным.

Следующие состояния могут привести к ложноположительным результатам:

1. ВИЧ.
2. Болезнь Лайма.
3. Малярия.
4. Пневмония (только определенные виды).
5. Системная красная волчанка.
6. Внутривенное употребление наркотиков.
7. Туберкулез.

Тест РПГА не идеален, но это надежный анализ, который может стать первым шагом, помогающим определить, заражены ли человек. При анализе крови сифилис может быть обнаружен уже через 1-2 недели после заражения. Наибольшую точность можно ожидать в течение трех месяцев, а не точные результаты возможны в любое время в течение первых 90 дней после заражения.

Люди, которые страдали от сифилисной инфекции в прошлом, также могут иметь ложно-положительный результат из-за задерживающихся в крови антител. Если РПГА тестирования возвращает отрицательный результат через 90 дней или позже после воздействия, это считается, что инфекция отсутствует.

Примечание! Другие болезни, такие как фрамбезия и пинта (два других типа кожных заболеваний), также могут привести к положительному показателю FTA-ABS. Иногда может быть ложноположительный результат, чаще всего у женщин с волчанкой.

Что показывает анализ

В большинстве случаев положительный результат РПГА указывает на сифилис врожденной или приобретенной формы. Также при помощи тестирования можно обнаружить следующие патологии:

• вирус иммунодефицита человека;
• гепатит;
• возвратный брюшной тиф;
• туберкулез легких;
• дифтерия;
• коклюш;
• воспалительные поражения слизистых оболочек ротовой полости и гениталий;
• формирование новообразований злокачественного происхождения;
• мононуклеоз инфекционной природы;
• диффузные поражения соединительных тканей;
• венерические заболевания.

Многих интересует вопрос, почему при подозрении на сифилис назначается именно анализ РПГА. Популярность такого тестирования в диагностике этой опасной болезни обусловлена его достоверностью. Медики уверяют, что анализ показывает правильный результат в 99% случаев.

При отсутствии антител бледной трепонемы реакция агглютинации не произойдет, что говорит о том, что человек здоров.

Стоит учитывать, что чувствительность такого теста очень высока, поэтому обнаружить возбудитель сифилиса удастся даже на скрытых стадиях заболевания.

Сдачу образца на такое тестирование назначают и при подозрении на другие болезни, например, коклюш или иерсиниоз. Востребованность анализа обусловлена тем, что по сравнению с другими серологическими тестированиями он более чувствителен, что увеличивает вероятность получения достоверного результата.